Soren, Gylfie, Twilight en Digger gaan op zoek naar de Grote Boom van Ga'Hoole, de legendarische plaats waar uilen worden opgeleid tot helden die het uilenkoninkrijk bewaken. De tocht is lang en moeilijk. En als ze eindelijk bij de Grote Boom aankomen, beseffen ze dat hun reis amper begonnen is en dat er grote uitdagingen op hen wachten. Maar als ze erin slagen om in de voetsporen van hun leiders te treden, zullen ze echte Ga'Hoole uilen worden - eerlijk, moedig, trouw en wijs. En dan is het hun beurt om het kwaad dat in het koninkrijk heerst te bestrijden...